Jak wytwarza się i bada peptydy badawcze

Budowanie łańcucha

W syntezie na fazie stałej pierwszy aminokwas zakotwicza się na żywicy, a kolejne reszty dodaje po jednej, każdą zabezpieczoną tak, by reagowała tylko zamierzona grupa. Po każdym sprzęganiu usuwa się grupy ochronne i dodaje następną resztę.

Błędy kumulują się wraz z długością: niewielki odsetek nieudanych sprzęgań na każdym etapie oznacza, że dłuższe peptydy niosą więcej zanieczyszczeń skróconych i z delecjami.

Odcięcie i oczyszczanie

Gotowy łańcuch odcina się od żywicy mocnym kwasem, zwykle kwasem trifluorooctowym (TFA), który usuwa też grupy ochronne łańcuchów bocznych. Surowy produkt oczyszcza się następnie preparatywną HPLC, która oddziela produkt docelowy od zanieczyszczeń.

TFA użyty w tym procesie to powód, dla którego wiele peptydów dostarcza się jako sole trifluorooctanowe, i częściowo powód, dla którego masa w fiolce przewyższa masę peptydu.

Liofilizacja

Oczyszczone frakcje łączy się i liofilizuje. Liofilizacja usuwa wodę w niskiej temperaturze i daje stabilny proszek, ale pozostawia nieco wilgoci resztkowej i higroskopijność.

Kontrola jakości

Nie każdą partię bada się pod każdym względem. CoA powinien podawać, które badania faktycznie wykonano.

• Analityczna HPLC dla czystości.
• Spektrometria mas dla tożsamości.
• Analiza aminokwasów lub zawartość azotu dla zawartości netto peptydu.
• Miareczkowanie Karla Fischera dla zawartości wody.
• Badania endotoksyn i jałowości do zastosowań komórkowych lub wrażliwych.