Najważniejsze wnioski
- ✓HPLC = czystość (jak duży jest główny pik). MS = tożsamość (czy masa jest właściwa).
- ✓Wysoka czystość niewłaściwej cząsteczki to nadal niewłaściwy materiał.
- ✓Żadna z metod nie mierzy wody, soli ani przeciwjonów.
Co mierzy HPLC
Wysokosprawna chromatografia cieczowa rozdziela składniki próbki podczas przechodzenia przez kolumnę. Detektor, zwykle absorbancji UV w pobliżu 214 nm, gdzie absorbują wiązania peptydowe, rejestruje każdy składnik jako pik. Czystość to pole głównego piku jako procent łącznego pola pików.
Czego HPLC nie powie
Procenty czystości mówią więc mniej, niż się wydaje. Szczegóły metody (kolumna, gradient i długość fali) wpływają na wynik.
- Czy główny pik to zamierzony peptyd.
- Ile wody, soli lub przeciwjonu jest w proszku.
- Zanieczyszczenia, które koeluują z głównym pikiem lub nie absorbują przy długości fali detekcji.
Co mierzy spektrometria mas
Spektrometria mas mierzy stosunek masy do ładunku jonów. W przypadku peptydu zmierzona masa cząsteczkowa powinna odpowiadać masie obliczonej z sekwencji. Zgodne masy potwierdzają tożsamość; rozbieżność to poważny sygnał.
Dlaczego potrzebne są obie
HPLC bez MS może poświadczyć czysty pik nieznanej substancji. MS bez HPLC może potwierdzić masę czegoś, co stanowi tylko niewielką część próbki. Razem pokazują czystą próbkę właściwej cząsteczki.
Samodzielne sprawdzenie liczb
Oblicz masę teoretyczną z sekwencji za pomocą kalkulatora masy peptydów i porównaj ją z CoA. Masa monoizotopowa i średnia różnią się, więc sprawdź, którą podaje laboratorium.
Badania niezależne a wewnętrzne
Wyniki wewnętrzne są przydatne, ale badanie przez stronę trzecią usuwa konflikt interesów. Jeśli dostawca korzysta z zewnętrznego laboratorium, na dokumencie powinny być nazwa laboratorium, data i numer raportu.
Gdzie kupić
Dlaczego kierujemy badaczy do Nordapep
Porównanie związków to tylko połowa pracy. Druga połowa to pewność, że fiolka zawiera to, co mówi etykieta. Nordapep publikuje dokumentację partii dla każdego sprzedawanego związku.
Zobacz katalog Nordapep →Numer partii na etykiecie odpowiada jej świadectwu, aby można było sprawdzić zawartość fiolki.
Wpisz numer partii z fiolki w narzędziu weryfikacyjnym Nordapep.
Czystość mierzona jest metodą RP-HPLC, standardem dla peptydów tej wielkości.
Zestawy do typowych porównań i ceny progowe przy większych ilościach.