Pontos principais
- ✓A pureza por HPLC compara o peptídeo-alvo com outras espécies relacionadas a peptídeos.
- ✓O teor líquido de peptídeo leva em conta água e contra-íons, e costuma ser menor que a pureza.
- ✓Em trabalhos sensíveis à concentração, corrija pelo teor líquido em vez de presumir que o frasco é todo peptídeo.
O que a pureza por HPLC mede
A cromatografia líquida de alta eficiência separa os componentes de uma amostra. O valor de pureza é a proporção do sinal que vem do peptídeo-alvo, em comparação com impurezas peptídicas truncadas, com deleções ou modificadas de outra forma.
Ela é cega a tudo o que não absorve no comprimento de onda de detecção, o que inclui a água e a maioria dos sais.
O que há de fato no frasco
Um peptídeo liofilizado raramente é 100% peptídeo em peso. O restante costuma ser composto por:
- Contra-íons, mais frequentemente trifluoroacetato (da purificação) ou acetato, que equilibram a carga dos resíduos básicos.
- Água residual, porque peptídeos liofilizados são higroscópicos.
- Pequenas quantidades de solventes residuais ou excipientes.
Teor líquido de peptídeo
O teor líquido de peptídeo é a fração em peso que é genuinamente peptídeo. É determinado por métodos como análise de aminoácidos ou teor de nitrogênio, e costuma ficar bem abaixo da pureza por HPLC. Peptídeos com muitos resíduos básicos carregam mais contra-íons, então seu teor líquido tende a ser menor.
Por que isso importa para as concentrações
Se você dissolve o que acredita serem 5 mg de peptídeo, mas apenas 80% do pó é peptídeo, a quantidade real é 4 mg e toda concentração calculada fica 20% errada. Para trabalho qualitativo isso pode não importar; para comparações quantitativas, importa.
A calculadora de solução-estoque deste site inclui um campo de teor de peptídeo para que você possa corrigir quando o valor for conhecido.
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A pureza é medida por RP-HPLC, o método de referência para peptídeos desse tamanho.
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