Pontos principais
- ✓O TFA é o subproduto habitual da purificação padrão por HPLC; o acetato é uma forma trocada comum.
- ✓Os contra-íons podem responder por 10-30% da massa do pó.
- ✓Em ensaios biológicos sensíveis, o TFA residual pode interferir, então vale conhecer a forma de sal.
De onde vêm os contra-íons
A purificação por HPLC de fase reversa costuma usar ácido trifluoroacético no solvente. O ácido se associa a resíduos básicos como lisina, arginina e a extremidade N-terminal, de modo que o produto liofilizado é um sal de TFA, a menos que seja trocado.
Acetato e outras formas
A troca de TFA por acetato, ou às vezes cloridrato, é feita em uma etapa adicional e normalmente custa mais. O acetato costuma ser preferido em ensaios nos quais o TFA residual poderia afetar células ou enzimas.
Por que isso muda o teor líquido
Cada sítio carregado traz um contra-íon com massa própria, e os peptídeos também retêm água. A massa de peptídeo por frasco é, portanto, menor que a massa de pó indicada, e é por isso que o teor líquido de peptídeo é informado separadamente da pureza por HPLC.
Quando isso importa para o seu trabalho
A calculadora de solução-estoque tem um campo de teor de peptídeo exatamente para esse ajuste.
- Ensaios com células podem ser sensíveis ao TFA.
- Cálculos de concentração devem usar o teor líquido, não a massa nominal.
- Comparações entre fornecedores só são justas se a forma de sal for a mesma.
O que procurar em um CoA
A forma de sal e o teor líquido de peptídeo (muitas vezes por análise de aminoácidos ou teor de nitrogênio) devem ser informados. Se faltarem, pergunte.
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Por que indicamos a Nordapep aos pesquisadores
Comparar compostos é só metade do trabalho. A outra metade é saber que o frasco contém o que diz o rótulo. A Nordapep publica a documentação de lote de cada composto que vende.
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A pureza é medida por RP-HPLC, o método de referência para peptídeos desse tamanho.
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