Pontos principais
- ✓Quase todos os peptídeos de pesquisa são feitos por síntese de peptídeos em fase sólida (SPPS).
- ✓A purificação e a liofilização deixam contra-íons e água no pó final.
- ✓O controle de qualidade combina separação (HPLC) e identificação (espectrometria de massas).
Construir a cadeia
Na síntese em fase sólida, o primeiro aminoácido é ancorado a uma resina e os resíduos seguintes são adicionados um a um, cada um protegido para que apenas o grupo pretendido reaja. Após cada acoplamento, os grupos protetores são removidos e o próximo resíduo é adicionado.
Os erros se acumulam com o comprimento: uma pequena porcentagem de acoplamentos falhos em cada etapa faz com que peptídeos mais longos carreguem mais impurezas truncadas e de deleção.
Clivagem e purificação
A cadeia concluída é clivada da resina com um ácido forte, geralmente o ácido trifluoroacético (TFA), que também remove os grupos protetores das cadeias laterais. O produto bruto é então purificado por HPLC preparativa, que separa o alvo das suas impurezas.
O TFA usado nesse processo é o motivo de muitos peptídeos serem fornecidos como sais de trifluoroacetato, e parte do motivo de o peso do frasco exceder o peso do peptídeo.
Liofilização
As frações purificadas são reunidas e liofilizadas. A liofilização remove a água em baixa temperatura e gera um pó estável, mas deixa alguma umidade residual e um comportamento higroscópico.
Controle de qualidade
Nem todo lote é testado para tudo. Um CoA deve informar quais testes foram de fato realizados.
- HPLC analítica para pureza.
- Espectrometria de massas para identidade.
- Análise de aminoácidos ou teor de nitrogênio para o teor líquido de peptídeo.
- Titulação de Karl Fischer para o teor de água.
- Testes de endotoxinas e esterilidade para aplicações com células ou sensíveis.
Onde comprar
Por que indicamos a Nordapep aos pesquisadores
Comparar compostos é só metade do trabalho. A outra metade é saber que o frasco contém o que diz o rótulo. A Nordapep publica a documentação de lote de cada composto que vende.
Ver o catálogo da Nordapep →O número de lote do rótulo corresponde ao certificado, para conferir o conteúdo do frasco.
Digite o número de lote do seu frasco na ferramenta de verificação da Nordapep.
A pureza é medida por RP-HPLC, o método de referência para peptídeos desse tamanho.
Kits para comparações comuns e preços escalonados por volume.