Punti chiave
- ✓Il TFA è il sottoprodotto abituale della purificazione HPLC standard; l'acetato è una forma scambiata comune.
- ✓I controioni possono rappresentare il 10-30% della massa della polvere.
- ✓Nei saggi biologici sensibili il TFA residuo può interferire, quindi conviene conoscere la forma salina.
Da dove vengono i controioni
La purificazione HPLC in fase inversa usa comunemente acido trifluoroacetico nel solvente. L'acido si associa ai residui basici come lisina, arginina e l'estremità N-terminale, quindi il prodotto liofilizzato è un sale di TFA a meno che non venga scambiato.
Acetato e altre forme
Lo scambio del TFA con acetato, o talvolta cloridrato, avviene in un passaggio aggiuntivo e di solito costa di più. L'acetato è spesso preferito per i saggi in cui il TFA residuo potrebbe influire su cellule o enzimi.
Perché cambia il contenuto netto
Ogni sito carico porta un controione con una propria massa, e i peptidi trattengono anche acqua. La massa di peptide per fiala è quindi inferiore alla massa di polvere indicata, motivo per cui il contenuto netto di peptide è riportato separatamente dalla purezza HPLC.
Quando conta per il vostro lavoro
Il calcolatore della soluzione madre ha un campo per il contenuto di peptide proprio per questa correzione.
- I saggi su cellule possono essere sensibili al TFA.
- I calcoli di concentrazione dovrebbero usare il contenuto netto, non la massa nominale.
- I confronti tra fornitori sono equi solo se la forma salina è la stessa.
Che cosa cercare in un CoA
La forma salina e il contenuto netto di peptide (spesso da analisi degli amminoacidi o contenuto di azoto) dovrebbero essere indicati. Se mancano, chiedete.
Dove acquistare
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La purezza è misurata con RP-HPLC, il metodo standard per peptidi di queste dimensioni.
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