Points clés
- ✓La pureté HPLC compare le peptide cible aux autres espèces peptidiques apparentées.
- ✓La teneur nette en peptide tient compte de l'eau et des contre-ions et est généralement inférieure à la pureté.
- ✓Pour les travaux sensibles à la concentration, corrigez selon la teneur nette plutôt que de supposer que le flacon n'est que du peptide.
Ce que mesure la pureté HPLC
La chromatographie liquide haute performance sépare les composants d'un échantillon. Le chiffre de pureté est la proportion du signal provenant du peptide cible, par rapport aux impuretés peptidiques tronquées, délétées ou autrement modifiées.
Elle est aveugle à tout ce qui n'absorbe pas à la longueur d'onde de détection, ce qui inclut l'eau et la plupart des sels.
Ce que contient réellement le flacon
Un peptide lyophilisé est rarement constitué à 100 % de peptide en poids. Le reste se compose typiquement de :
- Contre-ions, le plus souvent trifluoroacétate (issu de la purification) ou acétate, qui équilibrent la charge des résidus basiques.
- Eau résiduelle, car les peptides lyophilisés sont hygroscopiques.
- Petites quantités de solvants résiduels ou d'excipients.
Teneur nette en peptide
La teneur nette en peptide est la fraction en poids qui est véritablement du peptide. Elle est déterminée par des méthodes telles que l'analyse des acides aminés ou la teneur en azote, et se situe souvent bien en dessous de la pureté HPLC. Les peptides riches en résidus basiques portent davantage de contre-ions, leur teneur nette tend donc à être plus faible.
Pourquoi cela compte pour les concentrations
Si vous dissolvez ce que vous croyez être 5 mg de peptide alors que seulement 80 % de la poudre est du peptide, la quantité réelle est de 4 mg et chaque concentration calculée est fausse de 20 %. Pour un travail qualitatif, cela peut être sans importance ; pour des comparaisons quantitatives, non.
Le calculateur de solution mère de ce site comporte un champ de teneur en peptide pour corriger lorsque le chiffre est connu.
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La pureté est mesurée par RP-HPLC, la méthode de référence pour les peptides de cette taille.
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