Points clés
- ✓Le TFA est le sous-produit habituel de la purification HPLC standard ; l'acétate est une forme échangée courante.
- ✓Les contre-ions peuvent représenter 10 à 30 % de la masse de la poudre.
- ✓Dans les essais biologiques sensibles, le TFA résiduel peut interférer : il vaut donc la peine de connaître la forme de sel.
D'où viennent les contre-ions
La purification par HPLC en phase inverse utilise couramment de l'acide trifluoroacétique dans le solvant. L'acide s'associe aux résidus basiques tels que la lysine, l'arginine et l'extrémité N-terminale, de sorte que le produit lyophilisé est un sel de TFA à moins d'être échangé.
Acétate et autres formes
L'échange du TFA contre de l'acétate, ou parfois du chlorhydrate, se fait lors d'une étape supplémentaire et coûte généralement plus cher. L'acétate est souvent préféré pour les essais où le TFA résiduel pourrait affecter des cellules ou des enzymes.
Pourquoi cela modifie la teneur nette
Chaque site chargé porte un contre-ion ayant sa propre masse, et les peptides retiennent aussi de l'eau. La masse de peptide par flacon est donc inférieure à la masse de poudre indiquée, raison pour laquelle la teneur nette en peptide est rapportée séparément de la pureté HPLC.
Quand cela compte pour votre travail
Le calculateur de solution mère comporte un champ de teneur en peptide précisément pour cet ajustement.
- Les essais sur cellules peuvent être sensibles au TFA.
- Les calculs de concentration doivent utiliser la teneur nette, pas la masse nominale.
- Les comparaisons entre fournisseurs ne sont équitables que si la forme de sel est la même.
Que chercher sur un CoA
La forme de sel et la teneur nette en peptide (souvent issue de l'analyse des acides aminés ou de la teneur en azote) doivent être indiquées. Si elles manquent, demandez-les.
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