Points clés
- ✓Presque tous les peptides de recherche sont produits par synthèse peptidique en phase solide (SPPS).
- ✓La purification et la lyophilisation laissent des contre-ions et de l'eau dans la poudre finale.
- ✓Le contrôle qualité associe séparation (HPLC) et identification (spectrométrie de masse).
Construire la chaîne
En synthèse en phase solide, le premier acide aminé est ancré sur une résine et les résidus suivants sont ajoutés un à un, chacun protégé pour que seul le groupe voulu réagisse. Après chaque couplage, les groupes protecteurs sont retirés et le résidu suivant est ajouté.
Les erreurs se cumulent avec la longueur : un faible pourcentage de couplages ratés à chaque étape signifie que les peptides longs portent davantage d'impuretés tronquées et de délétion.
Clivage et purification
La chaîne terminée est clivée de la résine par un acide fort, couramment l'acide trifluoroacétique (TFA), qui retire aussi les groupes protecteurs des chaînes latérales. Le produit brut est ensuite purifié par HPLC préparative, qui sépare la cible de ses impuretés.
Le TFA utilisé dans ce procédé explique pourquoi de nombreux peptides sont fournis sous forme de sels de trifluoroacétate, et en partie pourquoi le poids du flacon dépasse celui du peptide.
Lyophilisation
Les fractions purifiées sont regroupées et lyophilisées. La lyophilisation retire l'eau à basse température et donne une poudre stable, mais laisse une certaine humidité résiduelle et un comportement hygroscopique.
Contrôle qualité
Tous les lots ne sont pas testés pour tout. Un CoA doit indiquer quels tests ont réellement été réalisés.
- HPLC analytique pour la pureté.
- Spectrométrie de masse pour l'identité.
- Analyse des acides aminés ou teneur en azote pour la teneur nette en peptide.
- Titrage Karl Fischer pour la teneur en eau.
- Tests d'endotoxines et de stérilité pour les applications sur cellules ou sensibles.
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