Puntos clave
- ✓La pureza por HPLC compara el péptido objetivo con otras especies relacionadas con péptidos.
- ✓El contenido neto de péptido tiene en cuenta el agua y los contraiones, y suele ser inferior a la pureza.
- ✓En trabajos sensibles a la concentración, corrija por el contenido neto en lugar de suponer que el vial es todo péptido.
Qué mide la pureza por HPLC
La cromatografía líquida de alta resolución separa los componentes de una muestra. La cifra de pureza es la proporción de la señal que procede del péptido objetivo, frente a impurezas peptídicas truncadas, con deleciones o modificadas de otro modo.
Es ciega a todo lo que no absorba a la longitud de onda de detección, lo que incluye el agua y la mayoría de las sales.
Qué hay realmente en el vial
Un péptido liofilizado rara vez es 100 % péptido en peso. El resto suele estar formado por:
- Contraiones, normalmente trifluoroacetato (de la purificación) o acetato, que equilibran la carga de los residuos básicos.
- Agua residual, porque los péptidos liofilizados son higroscópicos.
- Pequeñas cantidades de disolventes residuales o excipientes.
Contenido neto de péptido
El contenido neto de péptido es la fracción en peso que es realmente péptido. Se determina con métodos como el análisis de aminoácidos o el contenido de nitrógeno, y suele quedar bastante por debajo de la pureza por HPLC. Los péptidos con muchos residuos básicos llevan más contraiones, así que su contenido neto tiende a ser menor.
Por qué importa para las concentraciones
Si disuelve lo que cree que son 5 mg de péptido pero solo el 80 % del polvo es péptido, la cantidad real es de 4 mg y cada concentración que calcule tendrá un error del 20 %. Para trabajo cualitativo puede no importar; para comparaciones cuantitativas, sí.
La calculadora de solución madre de este sitio incluye un campo de contenido de péptido para corregirlo cuando se conoce la cifra.
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La pureza se mide por RP-HPLC, el método de referencia para péptidos de este tamaño.
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