Puntos clave
- ✓HPLC = pureza (cuánto es el pico principal). EM = identidad (si la masa es la correcta).
- ✓Una cifra de pureza alta para la molécula equivocada sigue siendo el material equivocado.
- ✓Ninguno de los dos métodos mide agua, sales ni contraiones.
Qué mide la HPLC
La cromatografía líquida de alta resolución separa los componentes de una muestra a su paso por una columna. Un detector, normalmente de absorbancia UV cerca de 214 nm, donde absorben los enlaces peptídicos, registra cada componente como un pico. La pureza es el área del pico principal como porcentaje del área total de picos.
Qué no puede decir la HPLC
Los porcentajes de pureza dicen, por tanto, menos de lo que parece. Los detalles del método (columna, gradiente y longitud de onda) afectan al resultado.
- Si el pico principal es el péptido previsto.
- Cuánta agua, sal o contraión hay en el polvo.
- Impurezas que coeluyen con el pico principal o no absorben a la longitud de onda de detección.
Qué mide la espectrometría de masas
La espectrometría de masas mide la relación masa/carga de los iones. En un péptido, la masa molecular observada debe coincidir con la calculada a partir de la secuencia. Las masas coincidentes respaldan la identidad; una discrepancia es una señal seria.
Por qué hacen falta ambas
Una HPLC sin EM puede certificar un pico limpio de una sustancia desconocida. Una EM sin HPLC puede confirmar la masa de algo que es solo una pequeña fracción de la muestra. Juntas muestran una muestra pura de la molécula correcta.
Comprobar los números usted mismo
Calcule la masa teórica a partir de la secuencia con la calculadora de masa de péptidos y compárela con el CoA. Las masas monoisotópica y media difieren, así que compruebe cuál indica el laboratorio.
Análisis independiente frente a interno
Los resultados internos son útiles, pero el análisis por terceros elimina el conflicto de intereses. Cuando un proveedor usa un laboratorio externo, el nombre del laboratorio, la fecha y el número de informe deben figurar en el documento.
Dónde comprar
Por qué enviamos a los investigadores a Nordapep
Comparar compuestos es solo la mitad del trabajo. La otra mitad es saber que el vial contiene lo que dice la etiqueta. Nordapep publica la documentación de lote de cada compuesto que vende.
Ver el catálogo de Nordapep →El número de lote de la etiqueta coincide con su certificado, para comprobar el contenido del vial.
Introduce el número de lote de tu vial en la herramienta de verificación de Nordapep.
La pureza se mide por RP-HPLC, el método de referencia para péptidos de este tamaño.
Packs para comparaciones habituales y precios escalonados por volumen.