Puntos clave
- ✓Casi todos los péptidos de investigación se fabrican por síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS).
- ✓La purificación y la liofilización dejan contraiones y agua en el polvo final.
- ✓El control de calidad combina separación (HPLC) e identificación (espectrometría de masas).
Construir la cadena
En la síntesis en fase sólida, el primer aminoácido se ancla a una resina y los siguientes residuos se añaden uno a uno, cada uno protegido para que solo reaccione el grupo deseado. Tras cada acoplamiento se retiran los grupos protectores y se añade el siguiente residuo.
Los errores se acumulan con la longitud: un pequeño porcentaje de acoplamientos fallidos en cada paso hace que los péptidos largos lleven más impurezas truncadas y con deleciones.
Escisión y purificación
La cadena terminada se separa de la resina con un ácido fuerte, normalmente ácido trifluoroacético (TFA), que también elimina los grupos protectores de las cadenas laterales. El producto bruto se purifica después por HPLC preparativa, que separa el objetivo de sus impurezas.
El TFA usado en ese proceso es la razón de que muchos péptidos se suministren como sales de trifluoroacetato, y parte de la razón de que el peso del vial supere el del péptido.
Liofilización
Las fracciones purificadas se reúnen y se liofilizan. La liofilización elimina el agua a baja temperatura y produce un polvo estable, pero deja algo de humedad residual y un comportamiento higroscópico.
Control de calidad
No todos los lotes se analizan para todo. Un CoA debe indicar qué pruebas se realizaron realmente.
- HPLC analítica para la pureza.
- Espectrometría de masas para la identidad.
- Análisis de aminoácidos o contenido de nitrógeno para el contenido neto de péptido.
- Valoración de Karl Fischer para el contenido de agua.
- Pruebas de endotoxinas y esterilidad para aplicaciones con células o sensibles.
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