Das Wichtigste in Kürze
- ✓Die HPLC-Reinheit vergleicht das Zielpeptid mit anderen peptidverwandten Spezies.
- ✓Der Nettopeptidgehalt berücksichtigt Wasser und Gegenionen und liegt meist unter der Reinheit.
- ✓Korrigieren Sie bei konzentrationsempfindlichen Arbeiten um den Nettogehalt, statt anzunehmen, das Fläschchen sei reines Peptid.
Was die HPLC-Reinheit misst
Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie trennt die Komponenten einer Probe. Der Reinheitswert ist der Anteil des Signals, der vom Zielpeptid stammt, im Vergleich zu verkürzten, deletierten oder anders veränderten Peptidverunreinigungen.
Sie ist blind für alles, was bei der Detektionswellenlänge nicht absorbiert, also auch für Wasser und die meisten Salze.
Was tatsächlich im Fläschchen ist
Ein lyophilisiertes Peptid besteht selten zu 100 % des Gewichts aus Peptid. Der Rest besteht typischerweise aus:
- Gegenionen, meist Trifluoracetat (aus der Reinigung) oder Acetat, die die Ladung basischer Reste ausgleichen.
- Restwasser, weil gefriergetrocknete Peptide hygroskopisch sind.
- Kleinen Mengen an Restlösungsmitteln oder Hilfsstoffen.
Nettopeptidgehalt
Der Nettopeptidgehalt ist der Gewichtsanteil, der wirklich Peptid ist. Er wird mit Methoden wie Aminosäureanalyse oder Stickstoffgehalt bestimmt und liegt häufig deutlich unter der HPLC-Reinheit. Peptide mit vielen basischen Resten tragen mehr Gegenionen, ihr Nettogehalt ist daher meist geringer.
Warum das für Konzentrationen wichtig ist
Wenn Sie vermeintlich 5 mg Peptid lösen, aber nur 80 % des Pulvers Peptid sind, beträgt die wahre Menge 4 mg und jede berechnete Konzentration liegt um 20 % daneben. Für qualitative Arbeiten mag das egal sein; für quantitative Vergleiche nicht.
Der Stammlösungsrechner auf dieser Website enthält ein Feld für den Peptidgehalt, damit Sie korrigieren können, wenn der Wert bekannt ist.
Bezugsquelle
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Die Reinheit wird per RP-HPLC angegeben, dem Standardverfahren für Peptide dieser Größe.
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