Das Wichtigste in Kürze
- ✓TFA ist das übliche Nebenprodukt der Standard-HPLC-Reinigung; Acetat ist eine gängige ausgetauschte Form.
- ✓Gegenionen können 10-30 % der Pulvermasse ausmachen.
- ✓In empfindlichen biologischen Assays kann Rest-TFA stören, daher lohnt es sich, die Salzform zu kennen.
Woher Gegenionen kommen
Die Umkehrphasen-HPLC-Reinigung verwendet häufig Trifluoressigsäure im Lösungsmittel. Die Säure lagert sich an basische Reste wie Lysin, Arginin und den N-Terminus an, sodass das gefriergetrocknete Produkt ein TFA-Salz ist, sofern es nicht ausgetauscht wird.
Acetat und andere Formen
Der Austausch von TFA gegen Acetat oder manchmal Hydrochlorid erfolgt in einem zusätzlichen Schritt und kostet meist mehr. Acetat wird oft für Assays bevorzugt, in denen Rest-TFA Zellen oder Enzyme beeinflussen könnte.
Warum es den Nettogehalt verändert
Jede geladene Stelle trägt ein Gegenion mit eigener Masse, und Peptide halten außerdem Wasser. Die Peptidmasse pro Fläschchen ist daher geringer als die angegebene Pulvermasse, weshalb der Nettopeptidgehalt getrennt von der HPLC-Reinheit angegeben wird.
Wann es für Ihre Arbeit wichtig ist
Der Stammlösungsrechner hat genau für diese Korrektur ein Feld für den Peptidgehalt.
- Zellbasierte Assays können empfindlich auf TFA reagieren.
- Konzentrationsberechnungen sollten den Nettogehalt verwenden, nicht die Nennmasse.
- Vergleiche zwischen Anbietern sind nur fair, wenn die Salzform gleich ist.
Worauf im CoA zu achten ist
Die Salzform und der Nettopeptidgehalt (oft aus Aminosäureanalyse oder Stickstoffgehalt) sollten angegeben sein. Fehlen sie, fragen Sie nach.
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Die Reinheit wird per RP-HPLC angegeben, dem Standardverfahren für Peptide dieser Größe.
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