Belangrijkste punten
- ✓Bijna alle onderzoekspeptiden worden gemaakt met vastefasepeptidesynthese (SPPS).
- ✓Zuivering en vriesdrogen laten tegenionen en water achter in het uiteindelijke poeder.
- ✓Kwaliteitscontrole combineert scheiding (HPLC) en identificatie (massaspectrometrie).
De keten opbouwen
Bij vastefasesynthese wordt het eerste aminozuur aan een hars verankerd en worden verdere residuen één voor één toegevoegd, elk beschermd zodat alleen de bedoelde groep reageert. Na elke koppeling worden beschermgroepen verwijderd en wordt het volgende residu toegevoegd.
Fouten stapelen zich op met de lengte: een klein percentage mislukte koppelingen per stap betekent dat langere peptiden meer ingekorte en deletieverontreinigingen bevatten.
Afsplitsing en zuivering
De voltooide keten wordt van de hars afgesplitst met een sterk zuur, doorgaans trifluorazijnzuur (TFA), dat ook de beschermgroepen van de zijketens verwijdert. Het ruwe product wordt daarna gezuiverd met preparatieve HPLC, die het doelproduct van de verontreinigingen scheidt.
Het TFA uit dat proces is de reden dat veel peptiden als trifluoroacetaatzout worden geleverd, en deels de reden dat het gewicht in de flacon hoger is dan het peptidegewicht.
Vriesdrogen
Gezuiverde fracties worden samengevoegd en gevriesdroogd. Vriesdrogen verwijdert water bij lage temperatuur en levert een stabiel poeder op, maar laat wat restvocht en hygroscopisch gedrag achter.
Kwaliteitscontrole
Niet elke batch wordt op alles getest. Een CoA moet vermelden welke tests daadwerkelijk zijn uitgevoerd.
- Analytische HPLC voor zuiverheid.
- Massaspectrometrie voor identiteit.
- Aminozuuranalyse of stikstofgehalte voor het netto peptidegehalte.
- Karl Fischer-titratie voor het watergehalte.
- Endotoxine- en steriliteitstests voor celgebaseerde of gevoelige toepassingen.
Waar kopen
Waarom we onderzoekers naar Nordapep sturen
Stoffen vergelijken is maar de helft van het werk. De andere helft is zeker weten dat het flesje bevat wat op het etiket staat. Nordapep publiceert batchdocumentatie voor elke stof die het verkoopt.
Bekijk de Nordapep-catalogus →Het batchnummer op het etiket hoort bij het certificaat, zodat je de inhoud kunt controleren.
Voer het batchnummer van je flesje in bij de verificatietool van Nordapep.
Zuiverheid wordt gemeten met RP-HPLC, de standaardmethode voor peptiden van deze grootte.
Sets voor veelvoorkomende vergelijkingen en staffelprijzen voor grotere volumes.