Belangrijkste punten
- ✓HPLC = zuiverheid (hoe groot is de hoofdpiek). MS = identiteit (klopt de massa).
- ✓Een hoge zuiverheid voor het verkeerde molecuul blijft het verkeerde materiaal.
- ✓Geen van beide methoden meet water, zouten of tegenionen.
Wat HPLC meet
Hogedrukvloeistofchromatografie scheidt de componenten van een monster terwijl ze door een kolom gaan. Een detector, meestal UV-absorptie rond 214 nm waar peptidebindingen absorberen, registreert elke component als een piek. De zuiverheid is de oppervlakte van de hoofdpiek als percentage van de totale piekoppervlakte.
Wat HPLC niet kan vertellen
Zuiverheidspercentages zeggen daarom minder dan het lijkt. Details van de methode (kolom, gradiënt en golflengte) beïnvloeden het resultaat.
- Of de hoofdpiek het bedoelde peptide is.
- Hoeveel water, zout of tegenion er in het poeder zit.
- Verontreinigingen die met de hoofdpiek co-elueren of bij de detectiegolflengte niet absorberen.
Wat massaspectrometrie meet
Massaspectrometrie meet de massa-ladingverhouding van ionen. Bij een peptide moet de gemeten molecuulmassa overeenkomen met de massa die uit de sequentie is berekend. Overeenkomende massa's ondersteunen de identiteit; een afwijking is een serieus signaal.
Waarom beide nodig zijn
HPLC zonder MS kan een schone piek van een onbekende stof certificeren. MS zonder HPLC kan de massa bevestigen van iets dat slechts een klein deel van het monster is. Samen tonen ze een zuiver monster van het juiste molecuul.
Zelf de cijfers controleren
Bereken de theoretische massa uit de sequentie met de peptidemassacalculator en vergelijk die met het CoA. Monoisotopische en gemiddelde massa verschillen, dus controleer welke het lab rapporteert.
Onafhankelijk versus intern testen
Interne resultaten zijn nuttig, maar testen door derden neemt het belangenconflict weg. Als een leverancier een extern lab gebruikt, moeten de naam van het lab, de datum en het rapportnummer op het document staan.
Waar kopen
Waarom we onderzoekers naar Nordapep sturen
Stoffen vergelijken is maar de helft van het werk. De andere helft is zeker weten dat het flesje bevat wat op het etiket staat. Nordapep publiceert batchdocumentatie voor elke stof die het verkoopt.
Bekijk de Nordapep-catalogus →Het batchnummer op het etiket hoort bij het certificaat, zodat je de inhoud kunt controleren.
Voer het batchnummer van je flesje in bij de verificatietool van Nordapep.
Zuiverheid wordt gemeten met RP-HPLC, de standaardmethode voor peptiden van deze grootte.
Sets voor veelvoorkomende vergelijkingen en staffelprijzen voor grotere volumes.