Belangrijkste punten
- ✓TFA is het gebruikelijke bijproduct van standaard HPLC-zuivering; acetaat is een veelgebruikte uitgewisselde vorm.
- ✓Tegenionen kunnen 10-30% van de massa van het poeder uitmaken.
- ✓In gevoelige biologische assays kan rest-TFA storen, dus het loont de zoutvorm te kennen.
Waar tegenionen vandaan komen
Zuivering met reversed-phase HPLC gebruikt doorgaans trifluorazijnzuur in het oplosmiddel. Het zuur paart met basische residuen zoals lysine, arginine en de N-terminus, zodat het gevriesdroogde product een TFA-zout is tenzij het wordt uitgewisseld.
Acetaat en andere vormen
TFA uitwisselen voor acetaat, of soms hydrochloride, gebeurt in een extra stap en kost meestal meer. Acetaat heeft vaak de voorkeur voor assays waarin rest-TFA cellen of enzymen kan beïnvloeden.
Waarom het het nettogehalte verandert
Elke geladen plaats draagt een tegenion met een eigen massa, en peptiden houden ook water vast. De massa peptide per flacon is daardoor lager dan de vermelde massa poeder, en daarom wordt het netto peptidegehalte apart van de HPLC-zuiverheid gerapporteerd.
Wanneer het voor uw werk uitmaakt
De stockoplossingcalculator heeft precies voor deze correctie een veld voor het peptidegehalte.
- Celgebaseerde assays kunnen gevoelig zijn voor TFA.
- Concentratieberekeningen moeten het nettogehalte gebruiken, niet de nominale massa.
- Vergelijkingen tussen leveranciers zijn alleen eerlijk als de zoutvorm gelijk is.
Waar u op een CoA op let
De zoutvorm en het netto peptidegehalte (vaak uit aminozuuranalyse of stikstofgehalte) moeten vermeld zijn. Ontbreken ze, vraag ernaar.
Waar kopen
Waarom we onderzoekers naar Nordapep sturen
Stoffen vergelijken is maar de helft van het werk. De andere helft is zeker weten dat het flesje bevat wat op het etiket staat. Nordapep publiceert batchdocumentatie voor elke stof die het verkoopt.
Bekijk de Nordapep-catalogus →Het batchnummer op het etiket hoort bij het certificaat, zodat je de inhoud kunt controleren.
Voer het batchnummer van je flesje in bij de verificatietool van Nordapep.
Zuiverheid wordt gemeten met RP-HPLC, de standaardmethode voor peptiden van deze grootte.
Sets voor veelvoorkomende vergelijkingen en staffelprijzen voor grotere volumes.