Punti chiave
- ✓Un ponte disolfuro è un legame covalente tra gli atomi di zolfo di due residui di cisteina e può chiudere un peptide ad anello.
- ✓Gli anelli sono più rigidi e di solito più resistenti ad alcuni enzimi rispetto alla catena lineare equivalente.
- ✓La formazione del ponte rimuove due atomi di idrogeno, quindi l'anello pesa circa 2 Da in meno della forma aperta.
- ✓Su un certificato di analisi, la massa osservata deve corrispondere alla forma ciclica, non a quella lineare.
Che cosa rende ciclico un peptide
Un peptide può essere ciclizzato in diversi modi: unendo le due estremità, collegando una catena laterale a un'estremità o collegando due catene laterali. La via più comune negli ormoni naturali è un ponte disolfuro tra due cisteine.
Come funziona un ponte disolfuro
La cisteina porta un gruppo tiolico. Quando due tioli vengono ossidati, si uniscono in un legame zolfo-zolfo. L'ossitocina è un peptide di nove residui con un ponte tra il primo e il sesto, e l'octreotide ne ha uno tra il secondo e il settimo.
Poiché il legame è covalente, è molto più forte delle deboli interazioni che mantengono il resto della forma del peptide.
Perché i ricercatori badano all'anello
Un anello limita il modo in cui la catena può ripiegarsi. Questo può migliorare il legame al recettore e la selettività e proteggere il peptide dagli enzimi che lo attaccano dalle estremità.
Il compromesso è che il ponte stesso è un punto di vulnerabilità chimica. Gli agenti riducenti possono romperlo e i peptidi con più di due cisteine possono formare l'accoppiamento sbagliato.
Che cosa significa per massa e purezza
La formazione di un ponte disolfuro rimuove due atomi di idrogeno, quindi la forma ciclica è circa 2 Da più leggera della forma aperta ridotta. In spettrometria di massa, questo piccolo spostamento è la firma di un anello chiuso correttamente.
In HPLC, una miscela di forme aperte, chiuse correttamente e accoppiate in modo errato può comparire come picchi aggiuntivi o un picco allargato, per cui il cromatogramma merita una lettura attenta.
Che cosa controllare su un certificato di analisi
Per un peptide ad anello, un CoA ha senso solo se affronta l'anello.
- La massa osservata è confrontata con la massa calcolata della forma ciclica?
- La traccia HPLC è un singolo picco pulito o ci sono spalle che potrebbero essere isomeri?
- La sequenza nel documento mostra l'accoppiamento del ponte disolfuro dove il peptide ne ha uno?
- Il numero di lotto corrisponde al flaconcino che avete in mano?
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