Belangrijkste punten
- ✓Een disulfidebrug is een covalente binding tussen de zwavelatomen van twee cysteïneresiduen en kan een peptide tot een ring sluiten.
- ✓Ringen zijn stijver en meestal beter bestand tegen bepaalde enzymen dan de overeenkomstige rechte keten.
- ✓Bij de vorming van de brug gaan twee waterstofatomen verloren, dus de ring weegt ongeveer 2 Da minder dan de open vorm.
- ✓Op een analysecertificaat moet de gemeten massa overeenkomen met de cyclische vorm, niet met de lineaire.
Wat een peptide cyclisch maakt
Een peptide kan op meerdere manieren worden gecycliseerd: door de twee uiteinden te verbinden, door een zijketen aan een uiteinde te koppelen of door twee zijketens te koppelen. De meest voorkomende route bij natuurlijke hormonen is een disulfidebrug tussen twee cysteïnes.
Hoe een disulfidebrug werkt
Cysteïne draagt een thiolgroep. Wanneer twee thiolen worden geoxideerd, verbinden ze zich tot een zwavel-zwavelbinding. Oxytocine is een peptide van negen residuen met een brug tussen het eerste en zesde residu, en octreotide heeft er een tussen het tweede en zevende.
Omdat de binding covalent is, is ze veel sterker dan de zwakke interacties die de rest van de peptidevorm op zijn plaats houden.
Waarom onderzoekers om de ring geven
Een ring beperkt hoe de keten kan vouwen. Dat kan receptorbinding en selectiviteit verbeteren en het peptide beschermen tegen enzymen die vanaf de uiteinden afbreken.
De keerzijde is dat de brug zelf een chemisch kwetsbaar punt is. Reductiemiddelen kunnen hem verbreken, en peptiden met meer dan twee cysteïnes kunnen de verkeerde paring vormen.
Wat het betekent voor massa en zuiverheid
Bij de vorming van een disulfidebrug gaan twee waterstofatomen verloren, dus de cyclische vorm is ongeveer 2 Da lichter dan de open, gereduceerde vorm. In massaspectrometrie is die kleine verschuiving het kenmerk van een correct gesloten ring.
Bij HPLC kan een mengsel van open, correct gesloten en verkeerd gepaarde vormen verschijnen als extra pieken of een verbrede piek, dus het chromatogram verdient een nauwkeurige lezing.
Waar je op een analysecertificaat op let
Voor een ringvormig peptide is een CoA alleen zinvol als het de ring behandelt.
- Wordt de gemeten massa vergeleken met de berekende massa van de cyclische vorm?
- Is het HPLC-spoor één schone piek, of zijn er schouders die isomeren kunnen zijn?
- Toont de sequentie op het document de disulfidepaaring waar het peptide er een heeft?
- Komt het batchnummer overeen met het flesje dat je vasthoudt?
Waar kopen
Waarom we onderzoekers naar Nordapep sturen
Stoffen vergelijken is maar de helft van het werk. De andere helft is zeker weten dat het flesje bevat wat op het etiket staat. Nordapep publiceert batchdocumentatie voor elke stof die het verkoopt.
Bekijk de Nordapep-catalogus →Het batchnummer op het etiket hoort bij het certificaat, zodat je de inhoud kunt controleren.
Voer het batchnummer van je flesje in bij de verificatietool van Nordapep.
Zuiverheid wordt gemeten met RP-HPLC, de standaardmethode voor peptiden van deze grootte.
Sets voor veelvoorkomende vergelijkingen en staffelprijzen voor grotere volumes.